Τυποποιημένη προετοιμασία:
Προετοιμάστε μικτά πρότυπα αποθεμάτων με ακριβώς να ζυγίσει (±0.01 mg) περίπου 10 mg κάθε προτύπων αναφοράς kavalactone σε μια ογκομετρική φιάλη 10-μιλ. Προσθέστε 7,0 μιλ. της μεθανόλης και υπερηχήστε μέχρι διαλυμένος. Αραιώστε στον όγκο με τη μεθανόλη και το μίγμα.
Ειδοποίηση: Εναλλακτικά, προετοιμάστε πρότυπα αποθεμάτων kavain κατά τρόπο ομοειδή και χρησιμοποιήστε τους παράγοντες απάντησης kavalactone που ποσολογούν ενάντια.
Αραιώστε τα πρότυπα αποθεμάτων για να δημιουργήσετε ένα ελάχιστο μιας τυποποιημένης καμπύλης τέσσερις-σημείου. Οι προτεινόμενες τυποποιημένες διαλύσεις του αποθέματος είναι 1:10, 1:25, και 1:100 χρησιμοποιώντας τη μεθανόλη.
Ειδοποίηση: Πρότυπα καταστημάτων στις κατεψυγμένες θερμοκρασίες (0 - 5°C). Το Kavalactones υποβιβάζει γρήγορα μετά από 48 ώρες. Η προετοιμασία των φρέσκων προτύπων αναφοράς πριν από κάθε ανάλυση συστήνεται.
Συσκευές
· Βαθμολογημένη αναλυτική ισορροπία ακριβής σε ±0.01 mg
· Η φιάλη, ογκομετρική, ταξινομεί το Α, ανάμεικτα μεγέθη
· Φιαλίδια, χρωματογραφία με την ΚΑΠ
· Σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής επίδοσης όπως περιγράφεται στο κεφάλαιο USP. Ελέγξτε και τεκμηριώστε ότι οι συσκευές, το λογισμικό, και τα υποσυστήματα καλύπτουν τις απαιτήσεις απόδοσης για τα προσόντα εγκατάστασης/τα προσόντα λειτουργίας (IQ/OQ).
· Φίλτρο, 0,45 µm, νάυλον Gelman Acrodisc (P/N 4426), πολυπροπυλένιο Whatman Puradisc™ (γάτα. Νο 6788-2504), γυαλί Whatman GD/X (γάτα. Νο 6894-2504) ή ισοδύναμο Sonicator
· Στήλη, YMCbasic, 5 µm, 4,6 X 250 χιλ. (γάτα. Αριθ. BA99S05-2546WT). Ισοδύναμη στήλη, YMC J'Sphere H80, 4µ, 4,6 X 250 (γάτα. Αριθ. JH08S04-2546WT).
Αντιδραστήρια
· Νερό, βαθμός HPLC ή Nanopure
· Μεθανόλη, βαθμός HPLC
· Ακετονιτρίλιο, βαθμός HPLC
· Φωσφορικό οξύ, βαθμός αντιδραστηρίων ACS
Προετοιμασία δειγμάτων:
Φυτικός ιστός
Ακριβώς ζυγίστε (± 0.1mg) περίπου 750 mg του λεπτά αλεσμένου μίσχου, της αποφλοίωσης, ή του υλικού ρίζας.
Τοποθετήστε το υλικό σε μια ογκομετρική φιάλη 50-μιλ. μαζί με 40 μιλ. της μεθανόλης/του νερού (70/30). Υπερηχήστε για 60 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου.
Επιτρέψτε στη φιάλη για να δροσίσετε στη θερμοκρασία δωματίου και να αραιώσετε στον όγκο με τη μεθανόλη/το νερό (70/30) και το μίγμα.
Δείγμα φίλτρων και θέσεων σε ένα φιαλίδιο HPLC και μια ΚΑΠ.
Σκόνη και μαλακό απόσπασμα (κόλλα)
Ακριβώς ζυγίστε (± 0,1 mg) περίπου 100 mg του αποσπάσματος σε μια ογκομετρική φιάλη 50-μιλ. (Το βάρος 100 mg είναι βασισμένο σε μια περιεκτικότητα σε kavalactone 50-60% στο απόσπασμα.) Ειδοποίηση: Προσεκτικά ομογενοποιήστε το απόσπασμα πριν από τη δειγματοληψία. Αυτό ολοκληρώνεται με την τοποθέτηση του αποσπάσματος σε ένα εμπορευματοκιβώτιο που βυθίζεται σε ένα 60° - ζεστό νερό 80° Γ - λουτρό μέχρι ελεύθερης ροής.
Προσθέστε 40 μιλ. της μεθανόλης και υπερηχήστε για 10 λεπτά ή έως ότου έχουν διαλύσει όλα τα στερεά.
Επιτρέψτε στη φιάλη για να δροσίσετε στη θερμοκρασία δωματίου και να αραιώσετε στον όγκο με τη μεθανόλη και το μίγμα.
Δείγμα φίλτρων και θέσεων σε ένα φιαλίδιο HPLC και μια ΚΑΠ.
Δείγματα σκονών
Το απόσπασμα Kava συνδυάζεται συχνά ή ψεκασμός - ξηρός επάνω στους διάφορους μεταφορείς. Για να δοκιμάσει επιτυχώς τα δείγματα σκονών, είναι απαραίτητο να αναπτυχθεί ένα βήμα προετοιμασιών δειγμάτων που ανακτεί τα kavalactones από το μεταφορέα. Αυτό μπορεί να ολοκληρωθεί με πρώτα να εξαγάγει με την καθαρό μεθανόλη ή το νερό.
Χρωματογραφικοί όροι:
Στήλη: YMCbasic, 5 µm, 4,6 X 250 χιλ.
Θερμοκρασία στηλών: 40°C
Ποσοστό ροής: 0,6 mL/min για YMCbasic 1.0 mL/min για J'Sphere
Κινητή φάση: isocratic 0,1% φωσφορικό οξύ: ισοπροπύλιο οινόπνευμα: ακετονιτρίλιο (64:16:20 v/v)
Ανίχνευση: 220 NM (246 NM για να βελτιώσει εναλλακτικά την επιλεκτικότητα)
Όγκος εγχύσεων: 5 µL
Χρόνος εκτέλεσης: 30 λεπτά
Διαδικασία:
Προετοιμάστε τις τυποποιημένες λύσεις αναφοράς και τις προετοιμασίες δειγμάτων όπως κατευθύνεται.
Κάνετε μια ενιαία έγχυση ενός κενού διαλυτών εξαγωγής.
Κάνετε την ενιαία έγχυση των τυποποιημένων προετοιμασιών.
Δημιουργήστε μια πλοκή γραμμικότητας των τυποποιημένων μέγιστων περιοχών εναντίον των τυποποιημένων συγκεντρώσεων.
Κάνετε τις ενιαίες εγχύσεις των προετοιμασιών δειγμάτων.
Υπολογίστε τη συγκέντρωση kavalactone στο δείγμα.
Καταλληλότητα συστημάτων:
Ο συντελεστής συσχετισμού της γραμμικής οπισθοδρόμησης πρέπει να είναι ≥0.999. Το ψήφισμα μεταξύ του desmethoxyyangonin και yangonin των αιχμών πρέπει να είναι ≥1.8.
Co. βιοτεχνολογίας Υ-χορταριών Shaanxi, ΕΠΕ.